Selección del Material Elite
La transmisión de enfermedades, a través de la semilla agamica, constituye el principal factor de diseminación e incremento de los valores de infección de los campos.
Contar con un material de partida optimo, es el resultado de la integración de aspectos tales como:
• La selección adecuada en campo de las plantas donadoras
• El uso de técnicas de diagnostico confiables y
• Métodos de eficientes de saneamiento que garanticen la eliminación de los patógenos
Selección de plantas donadoras
Observación directa:
• Plantas con síntomas, positivas y negativas
• Plantas asintomáticas, positivas y negativas
• La selección debe hacerse en bancos de germoplasma, de alta calidad genetica y fitosanitaria o en plantaciones destinadas a semilla
• Selección en plantaciones de vitroplantas donde la utilizacion de semilla sana disminuye los niveles de infeccion en los campos
• Observación de síntomas en plantas madre
• Los síntomas pueden confundirse y otras veces ser asintomaticos, características que limitan la selección de plantas donantes, asi mismo la alta sensibilidad requerida en las técnicas de diagnostico
• El cumplimiento de los requisitos de selección de plantas donadoras disminuye las posibilidades de entrada de microorganismos en el proceso de micropropagacion in vitro pero no es sinónimo de plantas libres de enfermedades
Diagnostico: Sensibilidad, Confiabilidad y Simplicidad
Plantas indicadoras:
• Principalmente usadas para detección de virus
• Tomar muestras de tejido infectado e inocular en la planta indicadora sintomatología
Diagnostico: Sensibilidad, Confiabilidad y Simplicidad
• Diagnostico serológico: La interacción entre un antigeno y un anticuerpo es la base para las pruebas serologicas. Esta tecnica puede ser demostrada de diferentes maneras a las cuales se denominan técnicas o pruebas serologicas
Antigeno: Agente químico o biológico capaz de desencadenar una respuesta inmunológica especifica cuando es introducido en un animal
Anticuerpo: Producto de la respuesta inmune, cuya principal propiedad es el reconocimiento especifico e interacción con el antigeno que le dio lugar
La unión especifica del anticuerpo y el antigeno es la propiedad fundamental usada en la inmunodiagnosis
Técnicas basadas en precipitación en liquido
Precipitación y microprecipitación
- Floculacion de làtex sensibilizado. Prueba del latex (papa)
Pruebas rutinarias: Inmunodifusión en gel
- Pruebas de difusión simples y dobles
- Inmunoelectroforesis
- Rocket inmunoelectroforesis
Ensayo inmunoenzimatico (ELISA)
Dot blot
Microscopia óptica
Microscopia electrónica
Tinción negativa de concentrados virales
Microscopia electrónica de inmunoabsorción (SEM)
Método de decoración de partículas virales
Método de inclusión de tejidos en resinas inertes para cortes ultrafinos
METODOS MOLECULARES DE DETECCIÓN
PCR
Hibridación molecular
Saneamiento
Obtención de plantas libres de patógenos
La combinación de técnicas tradicionales de saneamiento con el
cultivo de tejidos y métodos sensibles de diagnostico, es la clave de la eficiencia en la obtención de plantas libres de patógenos
Producción de plantas libres de virus
• Cultivo de meristemas
• Termoterapia (30-52º C)
• Termoterapia seguido del cultivo de meristemas
• Quimioterapia: antibioticos, Rivavirina (virus),fun
• Electroterapia
• Cultivo de callos
• Formación de vástagos adventicios seguido del cultivo de meristemas
• Injerto de meristemas sobre patrones
CULTIVO DE MERISTEMOS
Aplicaciones:
ü Propagación vegetativa
ü Obtención de plantas libres de virus (en cítricos)
ü Propagación y mantenimiento en bancos de germoplasma de variedades de plantas propagadas asexualmente
El cultivo de meristemas facilita la eliminación de patógenos
- El domo meristemático no está vascularizado (muchos patógenos se translocan por los tejidos de conducción).
- El número de partículas virales es menor en los meristemas que en otros tejidos (White, 1934).
- La velocidad de división celular a nivel del meristema es mayor que la velocidad de replicación de un virus.
- Las primeras plantas saneadas a partir del cultivo de meristemas fueron obtenidas por Morel y Martin entre 1952 y 1957 a partir de cultivos de papa y Dahlia.
Termoterapia (30-52º C)
El tratamiento por calor es eficaz contra virus y micoplasmas
Se debe elegir una temperatura y tiempo de tratamiento tales que la planta sea capaz de sobrevivir pero que permita la inactivacion del virus.
Ejs. Ha sido eficaz en frutales, caña de azúcar y mandioca.
En frutales se tratan solo las yemas axilares, durante 20-40 días a 37-38ºC, luego se injertan en un patrón libre de virus
Termoterapia seguido del cultivo de meristemas
Cultivo de callos
Quimioterapia: antibioticos, Rivavirina (virus),fun
A partir de callos y protoplastos
Injerto de meristemas sobre patrones (plantulas) libre de virus
El microinjerto resulta de gran importancia en el caso de especies leñosas ya que en este grupo de plantas el cultivo de meristemas es casi imposible
Primeros microinjertos con éxito: 1972 y 1975 con Citrus
MICROINJERTACIÓN
Las principales aplicaciones del microinjerto son:
• Obtencion de plantas libres de virus;
• Importación de plantas (por procedimientos de cuarentena): el riesgo es mínimo
• Separacion de virus en infecciones mezcladas; y Estudios sobre incompatibilidad en el injerto (NAVARRO, 1988)
Teniendo en cuenta que el costo inicial para una nueva plantación es muy alto, la mayoría de productores se preocupan mucho por reducir el tiempo que va desde la implantación hasta la entrada en producción (BURKHART, 1991)
El uso de portainjertos clonales, además de proporcionar uniformidad a los cultivos, tiene por objetivo la resistencia a plagas y enfermedades y adaptación a las condiciones adversas del suelo, tanto como precocidad en la fructificación, productividad y control del vigor de las plantas (LEITE & DENARDI, 1992),
Los portainjertos clonales para peral más conocidos, son el membrillero (Cydonia oblonga) y las selecciones a partir del cruzamiento Old Borne x Farmingdale (Pyrus communis)
INCOMPATIBILIDAD
SALAYA (1985), define compatibilidad como la capacidad del injerto y el portainjerto para producir una unión exitosa que permite a la nueva planta compuesta, desarrollarse satisfactoriamente.
Cuando plantas semejantes son injertadas, se unen con facilidad y continúan creciendo como una planta única. Cuando son injertadas plantas que no tienen tales semejanzas, el resultado final es la falta de unión del injerto.
Entre esos dos extremos se observan una gama de resultados que son totalmente imprevisibles
Síntomas de incompatibilidad
Las deformaciones en la unión del injerto que resultan de la incompatibilidad, generalmente pueden ser relacionadas con síntomas externos (HARTMANN & KESTER, 1975)
Algunos síntomas que han sido relacionados con combinaciones incompatibles son:
(a) Falla para formar unión de injerto en un gran porcentaje de casos.
(b) Amarillamiento del follaje en la última parte de la estación de crecimiento, seguido de defoliación anticipada.
Declinación del crecimiento vegetativo, muerte de los tejidos periféricos del injerto y, en general, falta de sanidad .
(c) Muerte prematura del árbol, que puede vivir sólo uno o dos años en el vivero.
d) Diferencias marcadas en la tasa de crecimiento o vigor entre portainjerto e injerto.
(e) Diferencias entre portainjerto e injerto en la época en que comienza o termina el crecimiento de la estación.
(f) Desarrollo excesivo en la unión del injerto, arriba o abajo del punto de injerto.
(g) Producción de plantas enanas o raquíticas.
Aplicación a Ápices de origen diverso:
Los de plantas contaminadas con patógenos sistémicos
Los de callos organogenicos
Los de embriones somáticos (aguacate)
Embriones inmaduros
SISTEMAS DE REGENERACION EN PLANTAS
Directos e indirectos ---- relación A/C
[>]auxina [<] citoquinina = formación de raíces
[<] auxina [>] citoquinina = formación de brotes, tallos
auxina = citoquinina ----- proliferación de callos
Callos: conjunto de células indiferenciadas
Cuando empieza la etapa de crecimiento 2° se da la desdiferenciacion de celulas parenquimatosas en el cambium vascular, a agregados meristematicos originando xilema y floema secundarios = REDIFERENCIACION
• Desdiferenciacion de células de un tejido para formar callos
• Rediferenciacion para formar un tejido especifico
TIPOS DE CALLOS
CALLOS FRIABLES: Fácilmente disgregable en pocos asociados celulares, Ideales para suspensión celular
CALLOS COMPACTOS: Células muy unidas que no dan la posibilidad de separar los agregados celulares, Ideales para organogenesis ya que crecen mejor porque forman puntos meristematicos que dan origen a los órganos
SISTEMAS DE REGENERACION EN PLANTAS
ORGANOGENESIS
Formación de órganos a partir de cualquier explante in vitro con capacidad de regeneración de una planta completa
- Rizogenesis
- Caulogenesis
INDUCCION:
- Medio de cultivo
- Explante: embriones, meristemas, hojas,
- Condiciones de cultivo
- Diferenciación celular
- Envejecimiento y perdida de crecimiento acelerado
Desarrollo de embriones que no son producto de una fusión gametica
Proceso mediante el cual se desarrolla un embrión a partir de un grupo de células somáticas
El embrión somático presenta todas las caracteristicas y fases morfologicas que se dan en un embrión zigotico
Caracteristicas
• Estructura bipolar con un eje apical-radical
• No poseen conexión vascular con el tejido materno - autonomia frente al tejido generador
Semilla artificial
• ETAPAS
• Inducción de embriones somáticos
• Medio de cultivo
• Tipo de explante
• Condiciones de cultivo
• Desarrollo de embriones somáticos
• Fase 0 : continuas divisiones, agregados celulares, auxina
• Fase 1: proliferación lenta
• Fase 2: división rápida, estado globular
• Fase 3: desarrollo del embrión al estado corazón y torpedo
• Proliferación
• Concentración hormonal
• Relacion [auxina] [N]
• Maduración
• Expansion de la celula
• Acumulacion de sustancias de reserva
• Germinación y conversión en plantas
• Desecacion
• Sincronizacion
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