Cultivo de células en suspensión
Las suspensiones celulares consisten en células libres o agregados de estas distribuidas en un medio en movimiento.
Pueden ser permanentes mediante el suministro continuo de nutrimentos
Establecimiento
Material de partida:
Callos friables
Etapas:n Disgregación.
n Tamizado.
n Crecimiento celular
Disgregación
Los callos se adicionan al medio de cultivo líquido.
Se coloca en un agitador orbital. 80-150 rpm.
Tiempo: de 15-30 días. El volumen del medio de cultivo en el frasco:1/5 de su capacidad. 
Tamizado
Se realiza bajo condiciones estériles.
Se debe tener en cuenta el tamaño del tamiz. Util para la multiplicación o subcultivo de las suspensiones Crecimiento celular
Fase de latencia Fase de crecimiento exponencial Fase de desaceleración Fase estacionaria Fase de muerte celular DETERMINACION DEL CRECIMIENTO CELULAR
Peso fresco Peso seco Volumen de células sedimentadas Turbidez Conteo de celulas Indice mitotico OBTENCION DE METABOLITOS SECUNDARIOS
Factores que afectan la producción Fase de crecimiento
Grado de diferenciacion celular
Ritmo de crecimiento de los cultivos
Medio de cultivo, pH, Temperatura
Adición de precursores e inhibidores
Factores ambientales (luz, oxigeno, CO2)
ESCALADO EN BIORREACTORES
PASOS A SEGUIR PARA EL ESCALADO DE CÉLULAS VEGETALES
INÓCULO:
Se prepara una suspensión 2 semanas antes de empezar en el biorreactor, y luego mantener reservas.
PREPARACIÓN DEL BIORREACTOR:
EL biorreactor debe ser limpiado y ensamblado. Revisar cada parte del biorreactor, poros, mangueras de salida y entrada, sensores, revisar hojas de los impeller y agujeros de aireación.
ESTERILIZACIÓN
Ya sea en autoclave o por el paso de vapor de agua supercalentada.
El biorrector debe ser incubado por tres días para determinar contaminación.
INOCULACIÓN:
El inóculo debe colocarse en un frasco adecuado, y comunicarlo por medio de un tubo de silicona o con una aguja de inoculación, la agitación debe reducirse, luego la aguja es reemplazada y nuevamente se enciende la agitación.
MUESTREO:
Las muestras se toman para determinar el crecimiento y la viabilidad de las células.
MEDICIÓN Y CONTROL DE LOS PARÁMETROS FÍSICOS Y QUÍMICOS
ü Temperatura
ü Velocidad de Agitación
ü pH
ü pO2
ü pRedox
ü pCO2
ü Luz
TEMPERATURA
Afecta considerablemente la célula y una de sus mayores manifestaciones se presenta en la membrana bilipídica. La disminución parece causar un estrés de tal manera que inhibe el crecimiento y algunos compuestos intermediarios se orientan hacia las rutas del metabolismo secundario.VELOCIDAD DE AGITACIÓN
ü Las células se manipulan permanentemente en suspensión a 50 rpm o rangos más elevados.
ü Está directamente relacionada con el diseño del agitador y sus aspas.
pH
ü Es indispensable en cualquier cultivo en suspensión ya que los cambios en este, indican alteraciones en el ambiente interno.
ü Varía con el autoclavado (descenso de 0.3-0.5 unidades)
pO2 - pCO2 - pRedox
pO2: La determinación del O2 disuelto en el medio líquido indica la cantidad disponible para el metabolismo celular. pCO2: Aunque el CO2 se puede utilizar en principio como fuente de carbono para el cultivo in vitro, la sacarosa es un material mucho mejor.LUZ
La duración del día, la irradiancia y la composición espectral son especialmente importantes. Si los tejidos no contienen clorofila, no existe la necesidad de la irradiación (exceso de CO2)
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